Тайны вирусов

...тысячи лет идет эта тихая невидимая война человека и вирусов...

  • Увеличить размер шрифта
  • Размер шрифта по умолчанию
  • Уменьшить размер шрифта

СИНТЕТИЧЕСКИЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ.

Более или менее сложные субстраты, необходимые для нормального развития исследуемых микробов и состоящие из химически чистых строго дозированных веществ, служащих для культивируемых микроорганизмов источниками азота, углерода, энергии, а также витаминов и минеральных солей.

В качестве источников азота в ряде случаев могут служить аммонийные соли минеральных или органических кислот (сернокислый или лимоннокислый аммоний и др.); хорошими источниками углерода и энергии являются сахара (глюкоза и др.). Реактивы для изготовления синтетических питательных сред подвергают специальной предварительной очистке (перекристаллизация и пр.).

Для приготовления синтетических питательных сред лучше пользоваться водой, деионизированной в дистилляторе с ионообменными смолами или перегнанной в присутствии марганцовокислого калия в аппаратах из нейтрального стекла. Вязкость, рН, окислительно-восстановительный потенциал и осмотическое давление синтетических питательных сред должны обеспечивать оптимальные условия жизнедеятельности исследуемых бактерий. Для приготовления плотных синтетических питательных сред добавляют агар-агар, тщательно очищенный от примесей минеральных и органических соединений.

Синтетические питательные среды применяют для культивирования ряда микробов с целью изучения протекающих в них процессов метаболизма, ассимиляции питательных веществ, для выяснения механизмов биосинтеза токсинов, антибиотиков, ферментов, пигментов и других биологически активных веществ, а также для исследования действия антибиотиков, витаминов, незаменимых аминокислот и других препаратов на развитие бактерий (Бактериальные факторы роста).

Синтетические питательные среды находят широкое применение и в качестве основы для культивирования тест-микробов при микробиологических методах определения аминокислот и витаминов в различных субстратах, а также для определения значения тех или иных веществ б питании бактерий и пр.

При культивировании ряда микробов, особенно во время выделения из организма возбудителей инфекционных заболеваний, синтетические питательные среды пока не могут заменить среды, содержащие пептоны, экстракты и другие соединения, химический состав которых еще точно не определен (Дифференциально-диагностические среды, Питательные среды). Это объясняется недостаточным знанием метаболизма и питательных потребностей многих бактерий, что препятствует созданию синтетических питательных сред из химически чистых соединений.

По мере изучения физиологии бактерий количество синтетических питательных сред будет возрастать.

Наряду с использованием в научных исследованиях и практической работе по микробиологии синтетические питательные среды применяют при культивировании тканей и клеток in vitro (Культура тканей), в частности при диагностике и изучении вирусов. Синтетические питательные среды применяют и для приготовления вакцин (BCG и др.), бактериофагов и пр. Профилактические и лечебные препараты, приготовляемые при помощи синтетических питательных сред, характеризуются большей чистотой по сравнению с препаратами, получаемыми с использованием сред с пептонами и экстрактами.

Ниже приводятся прописи некоторых синтетических питательных сред.

Универсальная среда Барроу для выращивания различных штаммов брюшнотифозных бактерий, в %

(NH4)2SO4 - 0,5

NaCl - 0,05

KH2PO4 - 0,2

Источник углерода (глюкоза, глицерин или молочная кислота) - 0,1

Аминокислоты: аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, beta-аланин, валин, гистидин, глицин, глютаминовая кислота, лейцин, лизин, метионин, оксипролин, пролин, серин, треонин, триптофан, фенилаланин - по 0,05; тирозин - 0,02, цистин - 0,001

Синтетическая среда для выращивания дизентернйных бактерий, в г (по В. Л. Троицкому и В. Д. Геккер)

КН2РO4 - 1,0

Na2HPO4 - 1,0

NaCl - 5,0

Na2CO3 (безводн.) - 2,0

MgSO4 - 0,1

Глюкоза - 5,0

Лимоннокислый аммоний (двузамещен.) - 4,5

Никотиновая кислота - 0,005

Триптофан - 0,05

Цистин - 0,1

Дистиллированная вода, в мл - 1000

рН = 7,4.

Среда Мюллера для выращивания дифтерийных бактерий, в мг

L - цистин - 70

DL-валин - 200

DL-метионин - 60

L-тирозин - 50

L-пролин - 75

L-аспарагиновая кислота - 500

D-глютаминовая кислота (хлористоводородная соль) - 750

Этиловый спирт, в мл - 0,7

Молочная кислота - 1,75

Пимелиновая кислота - 0,015

Никотиновая кислота - 0,23

Бета-аланин - 0,2

КСl - 40

Na2HPO4 - 300

MgSO4 x 7H2O - 100

CuSO4 x 5H2O - 0,5

СаСO3 (в НС1) - 20

FeSO4 x 7H2O - 0,5

MnCl2 x 4H2O - 0,25

ZnO (в НС1) - 0,25

Вода, в мл до - 100

Среда Рао для выращивания палочки чумы, в мг

DL-пролин - 140

DL-фенилаланин - 214

L-цистин - 80

DL-аланин - 120

D-глютаминовая кислота - 100

Глицин - 100

L-тирозин - 128

DL-серин - 140

DL-изолейцин - 130

DL-лейцин - 180

DL-метионин - 150

DL-валин - 130

Бактериальная зола, эквивалентная 50 мг бактерий 1/30 М фосфатный буфер с рН = 7,4, в мл - 50-100

Вода, в мл - до 1000

Из аминокислот незаменимыми являются пролин, фенилаланин и цистин; остальные аминокислоты только стимулируют рост чумного микроба.

Модифицированная среда ВКЛ для выращивания культуры BCG, в г

Глицин - 5

Аспарагин - 0,5

Глицерин (уд. в. 1,17705), в мл. - 20

Глюкоза - 4

Лимоннокислый натрий - 2

Лимонная кислота - 0,65

К2НРO4 - 5

NaCl - 5

MgSO4 - 1

PeSO4 (закись) - 0,05

ZnSO4 (1% раствор), в мл - 1

Дистиллированная вода, в мл - 1000

рН = 7,0-7,1.

Среда Сотона для выращивания микобактерий туберкулеза, в г

Аспарагин - 4

Лимонная кислота - 2

Лимоннокислое аммиачное железо - 0,05

MgSO4 x 7H2O - 0,5

К2НРO4 - 0,5

Глицерин - 60

Дистиллированная вода, в мл - 200

Растворяют при подогревании, фильтруют через бумагу, к фильтрату добавляют еще 800 мл дистиллированной воды, подщелачивают аммиаком до рН = 7,2 и стерилизуют при t°115° 30 мин.

Н. Плоскирев